第一篇：酵母文库相关问题十问十答

FAQ1: 在溶解AbA时，可以用DMSO（二甲基亚砜）么？

答：不能，需要用无水乙醇。

FAQ2: 膜体系文库筛选，做自激活检测的时候，阴性对照为什么在三缺四缺也正常生长？

答：如果只是轻微生长是有可能的，膜体系系统中的阴性对照，有时候由于菌的活力太强，培养时间太久，涂板的菌液量大等原因，导致在三缺、四缺上会有轻微生长，但长势会明显弱于阳性对照，只要功能验证生长正常，没有自激活，就可以进行后续筛库。

FAQ3: 如何验证一个蛋白是否具有转录激活活性？ 
答：通过酵母文库系统来做，可以将目的基因连接到pGBKT7载体，然后直接转入双杂筛选的菌株Y2HGold，但是不加AD载体。如果能在筛选培养基上活下来，就表明该目的基因具有类似AD的转录激活作用。

FAQ4: 拟南芥全长转录因子库，双杂和单杂诱饵载体及菌株分别是用什么？

答：双杂 BD 载体可用 pDEST32、菌株用 Y2HGold；单杂 BD 载体 用pHISi-1、菌株 用YM4271。

FAQ5: 如果研究的诱饵蛋白亚细胞定位在线粒体上，用核体系酵母文库还是膜体系酵母文库筛选比较好？

答：可以先尝试用膜系统酵母文库筛选，但前提该蛋白须有一个末端在细胞质里。

FAQ6: PlantCare网站是预测植物启动子的结构原件，是否可以预测昆虫或者其他动物的？

答：理论上不行，但是都是预测软件可以参考使用。

FAQ7：在做自激活检测的时候，为什么平板的克隆大小不均一？

答：克隆生长密度和生长时间都会让克隆大小不均一，生长稀疏的地方营养丰富，克隆会偏大，但是不影响结果判断。

FAQ8: 做核体系酵母单杂筛选的时候，一般启动子区域如何选择？串联3次的结构元件筛选是不是自激活更容易抑制？

答：经过大量单杂筛选实验，经验告知我们启动子的长短选择对于本身的自激活现象，两者本身没有直接的线性关系，具体的选择可能还是取决于我们后期主要研究的序列。

FAQ9: 核体系单杂筛选的空载pAbAi为什么不能用作阴性对照？又为什么连了目的片段自激活就可以抑制住？

答：第一：空载pAbAi本身是有自激活, 第二：外源片段可以破坏掉多克隆位点区域的序列

FAQ10:做酵母文库双杂筛选实验中，为什么后续筛到阳性克隆，进过测序发现阳性克隆序列与诱饵载体BD的序列是相同的？

答：实验中是有这种现象的，因为有的蛋白会以二聚体的形式进行互作。