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酵母双杂交筛选系统(蛋白/蛋白互作)

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(一)核体系双杂筛选

通过转录活化蛋白结合DNA上特异的序列而启动相关基因的转录反应,转录活化蛋白分别由相互独立的DNA 结合结构域(BD)和转录活化结构域(AD),通常情况下BD可以与GAL4上游活化序列(GALUAS)结合但不能引起转录,单独的AD也不能与GALUAS结合,只有当BD与AD分别表达的融合蛋白发生相互作用,两者在空间上相互靠近才能与GALUAS结合并且引起报道基因的转录。

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专业服务优势:

A、文库选择优势:

   1.定制一库四用(单杂、双杂、三杂、过表达载体文库)的特色酵母文库:使用优化后的clonetech的pGADT7-Rec2、GATEWAY二次重组法和“一步法重组”文库;

   2.提供商品化酵母cDNA文库。

B、筛选服务优势:

酵母核体系双杂交系统可研究蛋白与蛋白二元之间的相互作用方式,筛选步骤优化,具有成熟的实验操作流程,提供真实可靠的实验数据及原始图片。

C、筛选后可同时进行高通量筛选Y2H-seq。

 

服务详情: 

服务步骤

周期(工作日)

交付材料

价格

A、载体构建

15-20

1、诱饵质粒测序结果
2、检测图片
3、初筛图片
4、复筛图片
5、测序及分析结果+阳性克隆菌液
6、验证图片+验证的AD质粒
7、验证图片
8、项目报告

询价

B、自激活检测

10-15

C、初筛

15-20

D、复筛

E、阳性克隆测序

F、一对一验证

15-20

G、点板验证

H、项目结束


(二)膜体系双杂筛选:

利用分离的泛素系统(split-ubiquitin)进行跨膜蛋白相互作用的筛选。分离的泛素系统由N 端(Nub)和C 端(Cub)组成,通常两者具有很强的亲合力,可表现出野生型泛素的功能。现将Nub的3位异亮氨酸突变为甘氨酸(NubI 突变为 NubG),降低与Cub 的亲合力;同时将 Cub 部分与人工合成的 LexA 转录激活因子融合成一个融合蛋白Cub-LexA;z后将要验证的蛋白质分别与 NubG 和 Cub-LexA融合,形成 bait 融合蛋白(bait-cub-LexA)和 prey 融合蛋白(prey-NubG),如果 bait 和 prey 发生相互作用,即 NubG 和 Cub 的相互接近,会被UBPs 识别,使 LexA 切割,进入核内从而激活报告基因的转录。


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服务详情:

服务步骤

周期(工作日)

交付材料

价格

A、载体构建

15-20

1、诱饵质粒测序结果
2、自激活检测及功能验证图片
3、初筛图片
4、复筛图片
5、测序及分析结果+阳性克隆菌液
6、验证图片+验证的AD质粒
7、验证图片
8、项目报告

询价

B、自激活检测

15-20

C、初筛

15-20

D、复筛

E、阳性克隆测序

F、一对一验证(点对点)

15-20

G、点板验证

H、项目结束


专业服务优势:

A、文库选择优势:

   1.定制一库四用(单杂、双杂、三杂、过表达载体文库)的特色酵母文库:使用优化后的clonetech的pGADT7-Rec2、GATEWAY二次重组法和“一步法重组”文库;

   2.提供商品化酵母cDNA文库。

B、筛选服务优势:

酵母膜体系双杂交系统可研究膜蛋白或细胞质蛋白与蛋白二元之间的相互作用方式,筛选步骤优化,具有成熟的实验操作流程,提供真实可靠的实验数据及原始图片。

C、筛选后可同时进行高通量筛选Y2H-seq。



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