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CrY2H-Seq高通量酵母筛选

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载体改造:

CrY2H-seq体系中BD质粒pDBlox和AD质粒pADlox在ORF插入物的3 ‘端侧翼含有lox突变位点(lox66和lox71)。在两个蛋白发生互作后,AD和BD质粒通过Cre/lox发生重组,通过AD和DB载体上的特异性引物,通过PCR扩增可鉴定融合的ORF产物。

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筛选流程:

   1. Mating法对双杂文库筛选;

   2. 收集互作酵母单克隆;

   3. 提取重组质粒;

   4. 利用PCR扩增目的片段;

   5. 构建测序文库并高通量测序;

   6. 分析并注释测序结果。

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CrY2H-seq技术优势:

  • 简单的,低成本、高通量,对文库无特殊要求;

  • 可以构建转录因子之间的互作网络;

  • 可以病原菌与宿主之间的蛋白互作网络;

  • 可扩展至其他酵母筛选体系统(Y1H和Y3H),为了解细胞内信号转导过程提供技术支持。


应用实例:

  • 鉴定拟南芥转录因子互作网络

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(参考文献:S Trigg et al. / Nature Methods 14(8) 2017 819-830


  • 鉴定病原菌与宿主互作网络

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(参考文献:F Yang et al. / Nucleic Acids Research 46(3) 2017 e17



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