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载体改造: CrY2H-seq体系中BD质粒pDBlox和AD质粒pADlox在ORF插入物的3 ‘端侧翼含有lox突变位点(lox66和lox71)。在两个蛋白发生互作后,AD和BD质粒通过Cre/lox发生重组,通过AD和DB载体上的特异性引物,通过PCR扩增可鉴定融合的ORF产物。 筛选流程: 1. Mating法对双杂文库筛选; 2. 收集互作酵母单克隆; 3. 提取重组质粒; 4. 利用PCR扩增目的片段; 5. 构建测序文库并高通量测序; 6. 分析并注释测序结果。 CrY2H-seq技术优势:
应用实例:
(参考文献:S Trigg et al. / Nature Methods 14(8) 2017 819-830)
(参考文献:F Yang et al. / Nucleic Acids Research 46(3) 2017 e17) |